Il test Enzyme-linked immunospot (ELISPOT) è stato sviluppato da Czerkinsky nel 1983. Il test ELISPOT si basa su una versione modificata del test immunologico ELISA, da cui è stato sviluppato. Si tratta di un metodo sensibile per il monitoraggio delle risposte immunitarie nell'uomo e negli animali e uno strumento eccellente per la quantificazione accurata dei linfociti T che secernono citochine. Oggi il test ELISPOT è ampiamente utilizzato in diversi campi della ricerca biomedica, tra cui:
Il test ELISPOT delle citochine è progettato per enumerare le cellule che secernono citochine in sospensioni di cellule singole di tessuto linfoide, tessuto del sistema nervoso centrale, midollo osseo o preparati di cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC). Il test ha il vantaggio di rilevare solo i linfociti T attivati/di memoria e il rilascio di citochine può essere rilevato a livello di singola cellula, consentendo la determinazione diretta delle frequenze dei linfociti T. L'elevata sensibilità e la facilità di esecuzione, che consentono una conta diretta dei linfociti T reattivi ai peptidi senza previa espansione in vitro, rendono il test ELISPOT particolarmente adatto al monitoraggio delle risposte dei linfociti T.
Le cellule vengono incubate per un periodo di tempo definito nei pozzetti della piastra ELISPOT pre-rivestita con un anticorpo monoclonale ad alta affinità al quale si legherà la citochina prodotta durante l'incubazione. Successivamente, le cellule vengono lisate e i detriti vengono eliminati mediante lavaggio. Le aree in cui la citochina è stata catturata dall'anticorpo di rivestimento vengono rilevate con una combinazione di anticorpi biotinilati anti-citochina e streptavidina marcata con enzima o anticorpi anti-biotina. L'ultima fase del test consiste nell'aggiunta di un substrato che produce una zona colorata (“spot”), che rivela il sito di secrezione della citochina.
Eli. Scan è una soluzione economica per i laboratori che hanno solo un numero limitato di piastre da misurare e non necessitano di un sistema ad alta produttività.
È stato progettato esclusivamente per la misurazione dei fondi dei pozzetti punzonati delle piastre Millipore MultiScreen® con membrane Nunc SilentScreen® staccate ed è caratterizzato da un design molto compatto e da un'elevata velocità di scansione.
Lo strumento viene fornito come sistema completo che include unità scanner, PC con Windows 7 Professional®, software di analisi ELISPOT V5.1, schermo TFT, stampante a inchiostro a colori e due anni di garanzia. Opzionalmente, Eli.Scan può essere ordinato con un notebook al posto del PC da ufficio.
Scanner universale per piastre Eli.Scan Plus offre tutte le funzionalità dello scanner Eli.Scan ELISPOT
È in grado di misurare i test ELISPOT basati su membrane Nunc® staccate o fondi di pozzetti ritagliati da piastre Millipore®.
Inoltre, supporta l'analisi di piastre da microtitolazione a 6/12/24/48 e 96 pozzetti con fondi trasparenti.
Lo strumento viene fornito come sistema completo che include unità scanner, PC con Windows 7 Professional®, software Eli.Analysis V6.0, schermo TFT, stampante a inchiostro a colori e due anni di garanzia. Opzionalmente può essere ordinato con un notebook al posto del PC da ufficio.
Eli.Punch è uno strumento che consente di trasferire facilmente le membrane delle piastre Millipore a 96 pozzetti sulla pellicola adesiva Eli.Foil. Queste pellicole possono essere lette dai nostri strumenti Eli.Scan o Eli.Scan+. Inoltre, è una soluzione adatta per conservare i vostri test ELISPOT risparmiando spazio.
Eli.Foil è una pellicola adesiva appositamente progettata per ritagliare i fondi delle membrane delle piastre Millipore a 96 pozzetti. La pellicola contiene colla solo nei punti in cui verranno incollati i fondi dei pozzetti. Ciò significa che non ci saranno più incollature tra i fondi, sullo scanner, sulle dita o nel diario di laboratorio.
Kit
I kit sono disponibili in diversi formati (2 o 5 piastre) con diversi agenti coloranti (per colorazione con argento o enzimatica che produce rispettivamente macchie “nere” e “rosse”). Possono essere forniti con piastre trasparenti con fondo in polistirene o con fondo in membrana PVDF (PVDF). I KIT PB utilizzano un metodo di rilevamento con colorazione all'argento che produce macchie “nere”, mentre i KIT PR utilizzano un metodo di rilevamento enzimatico che produce macchie “rosse”.
Coppie di anticorpi
Le coppie di anticorpi sono state testate in termini di prestazioni di analisi con gli stessi reagenti secondari e materiali inclusi nei kit ELISPOT di U-CyTech. Le coppie di anticorpi sono fornite in un formato da 10 o 20 piastre (rispettivamente 960 o 1920 determinazioni) e sono accompagnate da una scheda tecnica (TDS). Le piastre e i reagenti secondari per le prestazioni ELISPOT possono essere acquistati separatamente (vedere Prodotti ausiliari).
Il test FluoroSpot a doppio colore è una modifica del test ELISPOT ed è progettato per rilevare i linfociti T che secernono due citochine a livello di singola cellula. Il test si basa sull'uso di coniugati marcati con fluorescenza, che possono essere visualizzati al microscopio a fluorescenza o con un analizzatore di immagini immunospot a fluorescenza.
Il test FluoroSpot prevede la colorazione simultanea con i coloranti Alexa 488 (verde) e R-PE (rosso) che visualizzano le cellule che producono le due citochine di interesse. Le cellule che rilasciano entrambe le citochine diventano visibili come punti gialli. I kit sono forniti con piastre con fondo in membrana PVDF (PVDF), appositamente ottimizzate per il test FluoroSpot.
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